一、HPLC流动池是什么？

流动池是HPLC检测器（如紫外/荧光检测器）的核心部件，其作用是将流动相和分离后的样品导入光学检测系统，通过光信号转换为电信号进行分析。

• 结构：通常由石英或蓝宝石制成，带有精密光路通道（光程常为10mm）。

• 类型：

• Z型池（常见于紫外检测器）：光路呈Z字形，减少气泡干扰。

• 直通型池：用于高灵敏度检测（如荧光检测器）。

二、HPLC发生堵塞有什么危害？

HPLC 流动池堵塞会导致系统压力异常升高，可能引发以下影响：

压力升高：堵塞时系统压力会急剧上升，超过仪器限压（通常 UPLC 系统为3000 psi， HPLC 系统为400 bar）时仪器会自动停止工作并报警。

仪器保护机制触发：当压力持续过高，仪器会因超压保护机制启动而停止运行，避免设备损坏。

潜在漏液风险：高压环境下可能导致接头、石英窗或垫片破裂，引发漏液故障，进一步加剧系统压力异常。 ‌

长期影响：若未及时处理，可能造成柱塞杆折断、单向阀损坏等硬件故障，需更换部件维修。

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三、HPLC流动池堵塞的常见原因

1. 颗粒物沉积：色谱柱填料脱落、样品未过滤（>0.45μm颗粒）。

2. 盐结晶：高盐缓冲液未彻底冲洗。

3. 生物污染：蛋白质、多糖等粘性物质吸附。

4. 化学沉淀：流动相不相容（如乙腈与磷酸盐混合）。

四、流动池堵塞的症状

• 基线噪音增大、峰形拖尾或分裂。

• 压力异常升高（但需排除色谱柱或管路堵塞）。

• 检测信号漂移或无响应。

五、逐步冲洗方法

1. 反向冲洗（首选）

适用情况：颗粒物或盐结晶堵塞。
步骤：

1. 准备合适的溶剂（取决于堵塞的性质以及所使用的检测器。有些堵塞需要温水，有些需要甲醇或硝酸。客户应查阅检测器的用户手册，以确定冲洗时使用合适的溶剂）。

2. 断开检测器与色谱柱的连接，将流动池出口端接入注射器。

3. 用以下溶剂依次反向冲洗（每次5-10mL，压力<50psi）：

• 超纯水 → 0.1%硝酸（溶解无机盐） → 异丙醇（去除有机物）。

  PS：以非常低的流速开始流动，确保流动池的背压保持在最大额定值以下（UV为1000 psi，RI为100 psi）。以低流量冲洗至少一小时。

4. 最后用甲醇冲洗，恢复正向流路。

2. 超声清洗

适用情况：顽固颗粒或生物污染。
步骤：

1. 拆下流动池（需参考仪器手册，避免损坏光学窗口）。

2. 置于烧杯中，加入异丙醇或1% SDS溶液，超声10分钟（40kHz，避免高温）。

3. 用超纯水冲洗后重新安装。

3. 强溶剂浸泡

适用情况：高分子或脂类污染。
推荐溶剂：

• 6M尿素（蛋白质污染）

• 0.1% TFA/乙腈（1:1）（疏水性物质）

• 30%氢氧化铵（慎用！仅针对极端有机残留）

六、预防堵塞的措施

1. 样品前处理：所有样品和流动相需经 0.22μm滤膜过滤。

2. 冲洗程序：

• 每日关机前用 10%甲醇水溶液 冲洗30分钟。

• 使用缓冲盐后，先用 水冲洗15分钟，再切换至有机相。

3. 定期维护：每月用 0.1M硝酸 反向冲洗一次（针对高盐体系）。

七、注意事项

⚠️ 避免使用盐酸或高浓度酸：可能腐蚀石英窗口。
⚠️ 勿用金属针头接触流动池：划伤光路会降低灵敏度。
⚠️ 拆卸风险：部分检测器（如二极管阵列）流动池拆装需专业校准，建议联系工程师。

总结

流动池堵塞可通过反向冲洗、超声或化学清洗解决，但预防胜于处理。定期维护和严格过滤是保障检测稳定性的关键！若清洗后问题仍存在，需检查检测器光学系统或更换流动池。