在执行清洗前，建议您订购Waters的 LC Purging Kit，其中包含清洗所需的关键溶剂（如丙酮）和专用玻璃瓶。

清洗前的关键准备

在开始以下所有步骤之前，必须完成：

1. 移除色谱柱：拆下所有UPLC色谱柱，用两通将管路直接连接，确保清洗液不经过色谱柱。

2. 断开检测器：

• 对于质谱（MS）检测器：必须将流路切换至废液或物理断开连接，严禁任何清洗液进入质谱离子源。

• 对于光学（UV/PDA）检测器：液流可以通过检测池进行清洗。

3. 移除沉子/过滤器：取下所有溶剂管路上的不锈钢沉子（过滤器），并将所有溶剂管路直接放入对应的清洗溶剂瓶中。

详细清洗步骤

请严格按照以下顺序，使用相应的溶剂对整个系统进行清洗。在每个步骤更换溶剂前，都需要用水进行中间冲洗，以避免酸碱混合。

第一步：碱清洗（主要针对PEG等聚合物）

• 清洗溶剂：

• 通道 A1/A2：10% 氢氧化铵(NH₄OH) 水溶液

  配制提醒：如果使用28-30%的浓氨水，需稀释3倍以达到10%的最终浓度。由于气味强烈，务必在通风橱中操作。

• 通道 B1/B2：100% 异丙醇 (IPA)

• 操作方法：

1. 用水彻底冲洗系统，以清除之前使用的流动相。

2. 将所有溶剂管路放入对应的碱清洗液中。

3. 灌注：对所有溶剂管路和样品管理器管路灌注5分钟。

4. 进样清洗：创建一个1分钟的LC方法和样品列表，设置流速0.8 mL/min，进行20次进样，每次进样体积10 μL。对于二元泵（BSM），设置比例为 50:50 (A:B)；对于四元泵（QSM），设置比例为 25:25:25:25 (A:B:C:D)。

• 中间冲洗：用水彻底冲洗系统，直至pH值恢复至实验室正常水平，以清除系统中的碱。

第二步：酸清洗（去除金属离子及其他残留）

• 清洗溶剂：

• 混合溶剂："Magic Mix"（水:乙腈:甲醇:异丙醇 = 1:1:1:1），并加入 2-10% 甲酸。

• 替代方案：可以使用丙酮代替乙腈（清洗套件186010210中包含丙酮）。

• 操作方法：

1. 将所有溶剂管路放入上述酸清洗液中。

2. 灌注：对所有溶剂管路和样品管理器管路进行灌注。

3. 进样清洗：重复与碱清洗步骤相同的进样程序（20次进样，0.8 mL/min，10 μL）。

• 中间冲洗：再次用水彻底冲洗系统，清除所有酸液。

第三步：IPA冲洗

• 清洗溶剂：100% 异丙醇 (IPA)

• 操作方法：

1. 将所有溶剂管路放入100% IPA中。

2. 灌注并进样清洗，重复相同的进样程序。

• 最终冲洗：最后，用水进行彻底冲洗，作为整个清洗流程的结束步骤。

完成后的收尾工作

1. 恢复系统：将所有溶剂管路放回日常使用的流动相中，重新安装色谱柱和质谱（MS）连接。

2. 更换沉子：如果不使用甲醇或IPA作为日常洗脱液，建议更换新的不锈钢或钛制沉子（部件号289002172），以防残留污染物再次进入系统。

3. 验证清洗效果：运行空白溶剂（如100%甲醇）进样，对比清洗前的基线背景，确认污染已被清除。

⚠️ 重要安全与操作提醒

• 防护与通风：配制和使用氨水、甲酸等腐蚀性试剂时，必须佩戴合适的防护手套和护目镜，并在通风橱内操作。

• 禁用于M-Class：此方案严禁用于ACQUITY M-Class系统，其PeekSil和硅胶管路无法耐受如此高的pH值。

• 监测pH值：在碱清洗后的水冲洗步骤中，建议监测废液的pH值，确保其已恢复至正常水平后再进行下一步。

• 溶剂管理：所有水相流动相建议每周重新配制，且切勿直接“加满”溶剂瓶

请注意： 此方案严禁用于带有HPS涂层的 ACQUITY Premier 系列模块（高浓度酸碱会损坏涂层）。如果您使用的是Premier系统，请务必遵循专属的清洗步骤（KCS中附带）。